В мире насчитывается около 2 миллиардов человек, инфицированных вирусом гепатита В (ВГВ), из которых более 350 млн. имеют хроническую инфекцию. Ежегодно от гепатита В умирает от 500 000 до 700 000 человек [1]. В России, благодаря включению вакцинации от гепатита В в национальный календарь профилактических прививок, повышению качества тест-систем для скрининговых исследований, комплексу мероприятий по повышению безопасности переливания крови и ее компонентов, заболеваемость острым гепатитом В (ОГВ) в последние годы демонстрирует тенденцию к снижению. Однако, хронический гепатит В (ХГВ), который регистрируется в 5-10% случаев у взрослых, а при перинатальном инфицировании новорожденных  формируется в 80-90% случаев, по прежнему представляет серьезную проблему. ХГВ опасен своими последствиями: он является одной из основных причин цирроза печени и главной причиной гепатоцеллюлярной карциномы. Цирроз печени развивается через 10-20 лет у 15-40% больных, страдающих  ХГВ. Заболеваемость раком печени составляет от 2 до 8 случаев на 100 больных циррозом печени в год. ХГВ требует дорогостоящей терапии с использованием этиотропных средств. Согласно Европейским рекомендациям, целью лечения является улучшение качества и продолжительности жизни за счет предотвращения прогрессирования болезни в декомпенсированный цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному путем устойчивого подавления вирусной репликации. В настоящее время для этиотропной терапии применяются следующие группы препаратов: стандартные интерфероны-альфа, нуклеозидные аналоги и пегилированные интерфероны.

Основным методом скрининговой диагностики гепатита В является определение HBsAg. Будучи главным компонентом наружной оболочки вируса, он определяется в инфицированных гепатоцитах, в крови и других биологических жидкостях. HBsAg –сложный протеин с несколькими иммунодоминантными участками, среди которых имеется группоспецифическая детерминанта «а» и подгрупповые детерминанты («y» или «d», «r» или «w»). Различные сочетания антигенных детерминант формируют субтипы вируса. Поверхностный антиген появляется уже в инкубационном периоде, обычно через 2-3 недели после инфицирования. В дальнейшем концентрация HBsAg нарастает вместе с подъемом активности АлАТ. [2]. HBsAg синтезируется в цитоплазме гепатоцитов. Только часть этого белка используется для построения новых вирусных частиц, основное же количество HBsAg поступает в кровь инфицированных лиц в форме сферических частиц диаметром 22 нм и палочковидных форм длиной до 200 нм. Количество таких частиц в крови превышает число инфекционных вирионов ВГВ в десятки и сотни тысяч раз. Концентрация HBsAg в крови при острой и хронической ВГВ-инфекции колеблется в широких пределах - от 0,1нг/мл до 1,0 мг/мл. Еще в 80-х годах прошлого века была отмечена корреляционная связь между титром HBsAg, наличием в сыворотке крови ассоциирующегося с вирусной репродукцией HBeAg  и выраженностью патологических изменений в ткани печени [3]. Дальнейшее изучение HBsAg показало, что при количественной оценке он может служить маркером, позволяющим прогнозировать течение заболевания.

Сегодня количественное определение HBsAg может использоваться не только для мониторинга течения хронического гепатита В, но и как дополнительный маркер для оценки вирусного ответа на этиотропную терапию. В 2009 г. в журнале Hepatology была опубликована работа Moucari и соавт. [5], в которой была показана роль количественного определения HBsAg в сыворотке крови для предсказания вирусологического ответа пациентов на противовирусную терапию. В качестве методов исследования использовались ВГВ-генотипирование, количественное определение ДНК ВГВ и количественное определение HBsAg сыворотки. В исследовании участвовали пациенты с HBeAg-негативным вариантом ХГВ. Лечение проводилось с помощью пегилированного интерферона-альфа на протяжении 48 недель. Все исследования выполнялись до начала лечения, а также на 12-й, 24-й и 48-й неделях терапии и в периоде последующего наблюдения – на 72-й и 96-й неделях.

На основе определения количества ДНК ВГВ различие между группами  пациентов, ответивших и не ответивших на лечение, начинает определяться с 12-й недели, и только к 24-й неделе можно корректно выделить группу пациентов, у которых проводимая терапия неэффективна. Что касается пациентов с рецидивом, то их невозможно было выделить по количеству ДНК ВГВ вплоть до окончания лечения.

На основе количественного определения HBsAg уже к 12-й недели лечения удалось выделить группу пациентов, не ответивших на терапию, а также пациентов с рецидивом, что делает возможным скорректировать лечение в ранние сроки. Например, можно заменить или дополнить существующие назначения противовирусной терапией аналогами нуклеозидов.

В исследовании Piratvisuth T. и соавт. [6] на фоне 48-недельной терапии пегилированными интерферонами HBeAg-позитивных больных ХГВ частота сероконверсии по HBeAg имела обратную зависимость от уровня HBsAg. При концентрации HBsAg менее 1500 МЕ/мл на 12 неделе терапии HBeAg сероконверсия отмечалась у 57% больных, на 24 неделе – у 54%.  При уровне HBsAg 1500 –20000 МЕ/мл HBeAg сероконверсия на 12 неделе лечения выявлена у 32%, на 24 неделе – у 26%. Содержание HBsAg более 20000 МЕ/мл на 12 и 24 неделях прогнозировало сероконверсию по HBeAg только у 16% и 15% пациентов, соответственно.

В настоящее время количественное измерение HBsAg в сыворотке крови становится все более распространенным и доступным в нашей стране. Наряду с дорогостоящими хемолюминесцентными системами, требующими специальной аппаратуры для их использования,  появилась тест-система «ГепатитИФА-HBsAg» компании «Алкор Био» для иммуноферментного определения количества поверхностного антигена. Данная тест-система может использоваться как для качественного определения HBsAg (для проведения скрининговых исследований), так и для мониторинга лечения и глубокого изучения естественного течения гепатита В.

Клинические испытания диагностическая система проходила на базе НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, г. Санкт-Петербург. В ходе исследований оценивалась чувствительность и специфичность набора «ГепатитИФА-HBsAg». В анализе участвовали 80 положительных (содержащих HBsAg) и 80 отрицательных  (не содержащих HBsAg) сывороток. Образцы были получены при обследовании пациентов с различной формой ГВ. В рамках клинических испытаний проводилось сравнение работы набора с тест-системой для количественного определения HBsAg методом хемилюминесцентного анализа (ХЛА) «ARCHITECT HBsAg» производства «Abbott Laboratories» (США). Анализ полученных данных показал полное совпадение результатов качественного анализа, т.е. 100% чувствительность и специфичность набора «Алкор Био».

При сравнении данных о количественном уровне HBsAg в исследуемых образцах отмечена сопоставимость показателей, полученных в тест-системе «ГепатитИФА-HbsAg» производства «Алкор Био» и референтном наборе. Коэффициент корреляции составил r = 0,99. В качестве примера, в таблице №1 приведены результаты количественной оценки HbsAg в низкотитражных образцах испытуемой панели  [7].  

Таблица №1.

Результаты измерения количественного содержания HbsAg в образцах испытуемой панели сывороток с низким содержанием антигена 

Результаты клинических испытаний позволяют сделать вывод о высокой чувствительности и специфичности «ГепатитИФА-HBsAg» и рекомендовать набор к широкому применению в лабораторной практике не только  для качественного, но что важно, для количественного определения HBsAg.  

Заключение 

Количественное определение HBsAg у пациентов с вирусным гепатитом В является важной характеристикой для прогноза естественного течения инфекции и оценки эффективности противовирусной терапии. Заслуживает огромного внимания возможная роль маркера в определении  окончательного срока терапии у больных ХГВ, получающих нуклеозидные аналоги.В качестве тест-системы для количественного определения HBsAg  рекомендуется набор «ГепатитИФА-HBsAg»,  показавший в клинических испытаниях 100% чувствительность и специфичность для выявления ВГВ в сыворотке крови, а также высокий коэффициент корреляции с данными хемолюминесцентного метода. Набор «ГепатитИФА-HBsAg» производства «Алкор Био» можно использовать как для проведения массовых скрининговых исследований по качественному выявлению HBsAg, так и для проведения мониторинга естественного течения хронического ГВ и эффективности проводимой терапии, который основан на количественном определении HBsAg . 

Список литературы 

1.      ВОЗ, Шестьдесят третья сессия всемирной ассамблеи здравоохранения, Вирусный гепатит, Доклад Секретариата. - 2010 г.- с.1

2.      Онищенко Г.Г., Жербун А.Б. Вирусные гепатиты в Российской Федерации СПб.: НИИЭМ им. Пастера, 2009г. - с. 63

3.      Мукомолов С.Л. Эпидемиологическая и клинико-лабораторная  характеристика хронических носителей  HBsAg в зависимости от выраженности патологического процесса.// Автореф. дисс. канд. мед. наук Л. 1984. – с. 24

1. Jaroszewicz J., Calle Serrano B., Wursthorn K. et al. Hepatitis B surface antigen (HBsAg) levels in the natural history of hepatitis B virus (HBV) – infection: a European perspective.// J.Hepatol. – 2010. – vol.52, N4. – p.514-522). Arauz-Ruiz P, Norder H, Robertson BH, Magnius LO. Genotype H: a new Amerindian genotype of hepatitis B virus revealed in Central America /J. Gen. Virol. 2002.- № 83(Pt 8).-р.2059-2073.
2. Brunetto MR et al. Predicting Responce to hepatitis B virus therapy. Hepatology 2009; 49:1141. Moucari, R.

1. Мукомолов С. Л., Иванова Н.В. и др. Новые возможности количественного определения поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) в сыворотке и плазме крови с использованием тест-системы российского производства.. Справочник заведующего КДЛ. №8, август 2011, c. 40-44